Protočna citometrija je dijagnostička i istraživačka tehnika poznata već dugi niz godina i široko korištena u onkologiji. Protočna citometrija omogućuje ispitivanje stanica koje čine suspenziju u laminarnoj ili slojevitoj tekućini, uređajem koji se naziva protočni citometar. Koje su indikacije za protočnu citometriju i kako se to radi?
Protočna citometrija koristi se u dijagnostici hematoloških novotvorina jer su to tekući tumori, ali to je samo pomoćna metoda. Međutim, vrijedno je zapamtiti da postoji jedan rak koji se može dijagnosticirati samo ovom metodom. Ovo je kronična limfocitna leukemija.
U drugim se neoplastičnim bolestima protočna citometrija koristi kao dijagnostičko pomagalo jer pokazuje vrlo važne značajke neoplastičnih stanica. Ova se metoda također koristi za procjenu učinkovitosti primijenjenog liječenja.
Protočna citometrija - što ona pokazuje?
Struja tekućine koja sadrži ispitne čestice propušta se konstantnom brzinom (100-2000 čestica u sekundi) kroz mjerno područje citometra. Ovdje optičke metode analiziraju oblike, dimenzije, unutarnju strukturu stanica i njihov sadržaj, npr. DNA. Sve stanice su optički označene.
Mjerenja se temelje na svojstvima raspršivanja laserskog svjetla od strane pojedinih stanica ili njihovih komponenata (jezgre, kromosomi, mitohondriji) ili fluorescencije koju one induciraju.
Optički signali pretvaraju se u električne signale koji se nakon analize grafički prikazuju kao mono- ili biparametrijska raspodjela.
Citometar također omogućuje segregaciju čestica nakon izlaska iz mjerne zone. Može se reći da aparat raspoređuje (odvaja) stanice s istim sastavnim elementima (preparativno sortiranje) ili ekstrahira određene vrste stanica (analitičko sortiranje).
Protočna citometrija omogućuje proučavanje populacijskih karakteristika stanica, analizu staničnih komponenata (posebno poput nukleinskih kiselina, proteina, površinskih i staničnih antigena), enzimske aktivnosti, membranskog potencijala, aktivnosti mitohondrija, unutarstaničnog pH, transporta iona i fluidnosti membrane.
Protočna citometrija - primjena
Protočna citometrija koja se koristi u dijagnostici omogućuje određivanje fenotipa neoplastičnih stanica i ekspresiju pojedinih proteina. Da bi se to postiglo, koriste se obilježena fluorescentna antitijela koja se na karakterističan način vežu za antigene na površini stanične membrane. Zahvaljujući tome moguće je odrediti stupanj njihove diferencijacije, podrijetla, prognostičke i terapijske markere, koji olakšavaju odluku o daljnjim dijagnostičkim i terapijskim postupcima.
Druga aplikacija za protočnu citometriju je praćenje učinkovitosti primijenjenog tretmana procjenom tzv "rezidualna bolest", što je udio stanica s tumorom sličnim fenotipovima koje ostaju nakon tretmana.
Protočna citometrija također olakšava istraživanje raka. Zahvaljujući ovoj metodi moguće je, na primjer, potražiti receptore koji su na površini neoplastičnih stanica i mogu postati ciljevi za liječenje.
Metoda omogućuje procjenu aktivnosti proteina unutar stanice. Također je moguće procijeniti stanični ciklus, npr. Određivanjem količine DNA u stanici.
Tijekom proliferacije, stanica prolazi kroz faze u staničnom ciklusu u kojima udvostručuje količinu DNA. Procjenom ove količine moguće je naznačiti u kojoj su fazi stanice, šire li se ili ne ili ulaze u apoptozu. Drugim riječima, uz pomoć protočne citometrije možete saznati pripremaju li se stanice za apoptozu, programirani proces smrti.
Protočna citometrija - budućnost
Protočna citometrija poznata je i koristi se u medicini već nekoliko desetljeća. Međutim, stalno se poboljšava i stvara nove dijagnostičke i istraživačke mogućnosti. U prvom razdoblju korištenja ove metode bilo je moguće utvrditi samo veličinu i stupanj granularnosti stanica.
Upotreba laserskog svjetla u uređajima protočne citometrije omogućuje pobuđivanje određenih fluorescentnih markera, a zatim procjenu njihove emisije. Suvremeni citometri omogućuju značajan porast broja biljega koji se istodobno procjenjuju, što definitivno prelazi u povećanje osjetljivosti ove metode.
Zato se koristi ne samo u dijagnozi neoplastičnih bolesti, već i za procjenu učinkovitosti liječenja.
O autoru
Pročitajte više članaka ovog autora
